质粒介导shRNA对心肌细胞kir2．1蛋白表达和搏动频率的影响

作者：李凡东; 雷印胜; 邹承伟; 范全心rna干扰质粒生物起搏器

摘要：目的构建抑制大鼠心肌细胞kir2．1基因的真核表达质粒pEGFP6-kir2．1，观察对大鼠心肌细胞kir2．1信使RNA（mRNA）、蛋白表达情况及搏动频率的影响。方法选择5个针对大鼠心肌细胞kir2．1基因的RNA干扰（RNA interference）位点，设计合成5对相应的寡核苷酸链，形成双链后依次将其连人带有U6启动子的载体，得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP6-kir2．1。转染大鼠心肌细胞，并将其分为3组：实验组、阴性质粒对照组和空白对照组。转染后72h，用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白印迹法（Western—blotting）检测kir2．1mRNA和蛋白表达情况，并观察细胞搏动频率。结果转染后72h，实验组心肌细胞kir2．1mRNA和蛋白表达明显低于两对照组（P〈0．01），两对照组间比较差别无统计学意义；实验组搏动频率增加，并显著高于两对照组（P〈0．01），两对照组之间搏动频率差别无统计学意义。结论真核表达质粒pEGFP6-kir2．1能明显抑制大鼠kir2．1基因的表达，提高大鼠心肌细胞的自律性。

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