作者：张俊霞; 徐金升; 冯雨; 白亚玲; 张胜雷; ...酸性环境肌细胞平滑肌钙通道l型runx2
摘要：目的 探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的影响及可能机制。方法 体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs按随机数字表法分为正常对照组、高磷＋p H7.4、高磷＋p H7.1和高磷＋p H6.8（在高磷培养基的基础上调整p H值为6.8、7.1和7.4三个亚组）。刺激4 d后,采用RT-PCR检测L型钙通道（LTCC）α_（1C）、β_2和β_3亚基,Runt相关转录因子2（Runx2）及Smad1基因的表达;应用钙离子探针Fluo-3/AM检测VSMCs胞外钙离子内流的效应变化。刺激14 d后,对各组细胞进行钙化染色、钙含量和碱性磷酸酶（ALP）活性测定。结果 与正常对照组比较,高磷＋p H7.4组钙含量、ALP活性、Runx2和Smad1mRNA的表达明显增高（88.26±6.43比22.39±3.19、94.33±3.08比20.39±1.18、0.37±0.02比0.01±0.00、0.65±0.05比0.07±0.01,均为P〈0.05）;与高磷＋p H7.4组比较,高磷＋p H7.1组和高磷＋p H6.8组的钙含量、ALP活性、Runx2和Smad1mRNA的表达均降低（69.95±1.72和50.74±3.29、51.11±2.05和34.62±1.13、0.25±0.02和0.09±0.01、0.44±0.04和0.23±0.01,均为P〈0.05）。与正常对照组比较,高磷＋p H7.4组的LTCCβ_3亚基mRNA表达水平增加（0.80±0.01比0.34±0.13,P〈0.01）,高磷＋p H7.1组和高磷＋p H6.8组的LTCCβ_3亚基mRNA表达水平均下降（0.64±0.11和0.43±0.01,均为P〈0.01）。各组之间LTCCα_（1C）和β_2亚基mRNA的表达差异无统计学意义（P=0.08和0.74）。与正常对照组比较,高磷＋p H7.4组的VSMCs胞内钙离子浓度增加（438.33±7.50比149.54±20.89,P〈0.05）;高磷＋p H7.1组和高磷＋p H6.8组的VSMCs胞内钙离子浓度均降低（329.66±16.64和234.00±17.43,均为P〈0.01）。结论 酸性环境可以抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其可能是通过抑制LTCCβ_3亚基表达,降低VSMCs钙离子内流,阻滞VSMCs发生表型转化来实现的。
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