作者：王安平; 高琪; 顾亚萍; 周华云; 王善青; ...恶性疟原虫氯喹抗药性pfcrt基因巢式pcr
摘要：目的建立一种恶性疟原虫氯喹抗药性基因pfcrt点突变的检测方法,以判断是否存在氯喹抗药性.方法根据恶性疟原虫pfcrt基因序列设计巢式PCR引物,以恶性疟原虫DNA为模板扩增出一条包含第76位密码子的DN段;扩增产物经限制性内切酶ApoI消化,用琼脂糖凝胶电泳观察恶性疟原虫pfcrt等位基因是否为突变型.结果 31份样本经巢式PCR扩增均出现140 bp左右的特异性片段.酶切消化后,9份滤纸血样本中有4例出现1条140 bp左右的片段,为突变型pfcrt等位基因,其余5份出现97 bp与48 bp两种酶切片段,为野生型pfcrt等位基因;22份血涂片样本中有10份突变型,突变率为45.16%.14例突变样本中,有1例体内实验氯喹治疗有效.结论巢式PCR-RFLP法可以快速、高效的检测恶性疟原虫pfcrt基因76位密码子的点突变,并且能够初步应用于恶性疟原虫氯喹抗药性的鉴别.
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