作者：蔡国斌; 何立; 蒋明森; 章莹; 赵琴平; 杨...日本血吸虫酚氧化酶分子量亚基组成
摘要：目的初步分析日本血吸虫酚氧化酶(pheno1 oxidase,PO)天然蛋白分子的分子量及其亚基组成.方法将42 d龄活成虫置于含0.05%戊巴比妥钠的RPMI 1640培养基中23 C孵育8 h后,PBS(pH 6.8)洗净,分离雌、雄成虫,研磨呈匀浆,超声粉碎、低温高速离心,取上清(含PO)进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),分别在两侧切取胶宽约1 cm进行酶染色,然后用解剖刀准确切下相应的未染色的凝胶.经真空冷冻干燥机冻干后碾成粉末,高速电动匀浆成浆糊状,冷浸过夜,高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗蛋白,进行SDS-PAGE.利用SDS-PAGE与PAGE(点加1孔预染Mark蛋白)的结果,对照分析酚氧化酶蛋白的可能分子量及其亚基组成.结果 PAGE:日本血吸虫雌虫、雄虫酚氧化酶蛋白均表现为迁移率相同的1条主带,其对应分子量大约为81 kD.SDSPAGE:酚氧化酶粗蛋白共出现5条带,分别为81、64、54、41 kD和27 kD.结论初步分析日本血吸虫雌、雄成虫酚氧化酶天然蛋白分子的分子量及其亚基组成基本相同,可能为单体酶(分子量81kD)或由3个27 kD相同亚基构成的同聚体.其确切的分子特征有待于进一步研究.
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