作者：肖成; 金海国; 魏天; 高一; 于永生; 张立...小尾寒羊sparcl1基因编码区克隆组织表达差异
摘要：为了探究小尾寒羊富含半胱氨酸酸性分泌蛋白类似物1(secreted protein acidic and rich in cysteine like 1,SPARCL 1)基因结构及其各组织间表达差异,试验提取小尾寒羊肝脏组织总RNA,根据GenBank中公布的绵羊SPARCL 1基因序列设计引物,应用PCR技术扩增SPARCL 1基因编码区(CDS)。将扩增产物连接到pMD18-T载体进行测序,获得小尾寒羊SPARCL 1基因完整CDS区序列信息,应用生物信息学软件分析序列及蛋白结构。以小尾寒羊心脏、肝脏、肌肉、胃、十二指肠、小肠组织mRNA为模板,通过实时定量荧光PCR技术检测SPARCL 1基因在小尾寒羊各组织间的表达差异。结果显示,试验成功获得小尾寒羊SPARCL 1基因CDS 1962 bp,编码653个氨基酸;分子质量为74.39 ku,理论等电点为4.64,为亲水性蛋白质;SPARCL 1基因具有信息肽切割位点,为分泌蛋白;小尾寒羊SPARCL 1基因序列与NCBI中绵羊序列同源性为99.80%,SPARCL 1基因CDS区出现4处突变位点,但未引起氨基酸改变;SPARCL1蛋白存在77个蛋白磷酸化位点和3个糖基化位点;SPARCL1蛋白表达预测主要定位在细胞质;SPARCL1蛋白二级结构中α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲分别占31.9%、6.4%、28.7%和33.0%,三级结构预测结果与其一致。SPARCL 1基因在小尾寒羊皮下脂肪组织中相对表达量明显高于其他组织。本研究成功克隆获得小尾寒羊SPARCL 1基因CDS区完整序列,并对其序列、蛋白理化特性、结构及各组织间表达差异进行了详细分析,为研究小尾寒羊SPARCL 1基因功能,探究其在小尾寒羊脂肪代谢过程中可能发挥的作用提供参考依据。
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