作者：呼凤丽; 徐丽媛; 张志飞; 周伟光小分子干扰rna牛胚胎气管细胞toll样受体9实时荧光定量pcr
摘要：为研究牛胚胎气管（bovine embryonic tracheal,EBTr）细胞Toll样受体9（Toll-like receptors 9,TLR9）在牛疱疹病毒Ⅰ型（bovine herpesvirus type 1,BHV-1）感染的天然免疫反应中的作用,本试验利用小分子干扰RNA（siRNA）技术,以TLR9为靶向分别设计并合成3条siRNA干扰序列,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测应用siRNA-TLR9干扰后TLR9基因的表达变化,筛选出最佳的siRNA-TLR9干扰序列,继而转染EBTr细胞使其TLR9基因沉默后感染BHV-1,用TaqMan实时荧光定量PCR方法检测BHV-1不同时间点的增殖变化。结果显示,转染48h后,与阴性对照组相比,siRNA-TLR9A、siRNA-TLR9B和siRNA-TLR9C分别对TLR9mRNA表达量下调了60.90%、24.05%和40.75%。筛选出siRNA-TLR9段在12-72h可以显著抑制TLR9mRNA表达（P〈0.05）。用该片段转染EBTr细胞再感染BHV-1后,6-72hsiRNA-TLR9A组BHV-1DNA拷贝数低于对照组。本试验成功筛选出了特异性的抑制EBTr细胞TLR9基因的siRNA序列,并证明抑制TLR9的表达可降低BHV-1的增殖能力。
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