作者：王林楠; 汪雷; 宋跃明; 刘立岷; 杨曦; 丰...神经干细胞神经营养因子3慢病毒载体转染
摘要：目的 通过慢病毒载体将NEP1-40（Nogo extracellular peptide residues 1-40）及神经营养因子_3（neurotrophin 3,NT-3）双基因转染入神经干细胞（neural stem cells,NSC_s）内进行表达,探讨NEP1-40及NT-3双基因转染NSC_s的可行性,为NSC_s体内实验奠定基础。方法 将SD大鼠胚胎室管膜区NSC_s采用空载慢病毒载体（A组）、NEP1-40慢病毒载体（B组）、NT-3慢病毒载体（C组）及NEP1-40和NT-3慢病毒载体（D组）进行转染,以未转染病毒的细胞作为对照组（E组）。用感染复数（multiplicity of infection,MOI）为5、10、15的慢病毒载体分别转染24、48、72 h,荧光显微镜观察转染后细胞内荧光表达情况,确定慢病毒载体的最佳MOI和收样时间。再分别通过实时荧光定量PCR及Western blot,检测转染后细胞中NEP1-40及NT-3基因的表达,以及细胞和培养基中NEP1-40及NT-3蛋白的表达。结果 荧光显微镜观察示,MOI为10时NEP1-40和NT-3基因慢病毒载体在NSC_s内转染率最高,最佳时间为转染48 h时。实时荧光定量PCR及Western blot检测示,B、D组NEP1-40 m RNA相对表达量和蛋白相对表达量均显著高于A、C组,差异有统计学意义（P〈0.05）。C、D组NT-3 m RNA相对表达量和蛋白相对表达量均显著高于A、B组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 通过慢病毒载体可将NEP1-40及NT-3双基因成功转染入NSC_s内,在NSC_s内稳定表达,且两种目的基因在表达过程中无相互拮抗或促进作用。
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