作者：叶雨辰; 张长春; 朱坤; 许刚; 韩仲兵; 乐...蜂毒肽终板软骨细胞大鼠
摘要：目的观察蜂毒肽（Melittin）对IL-1β诱导的大鼠终板软骨细胞（endplatechondrocytes，EPCs）Ⅱ型胶原表达的影响。方法取4周龄sD大鼠进行腰椎EPCs培养，并行形态学观察、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定。取第3代EPCs，采用MTT法确定IL-1β及Melittin对细胞干预的最适浓度。然后将第3代EPCs随机分为4组：A组为正常组，不加任何药物；B组加入最适浓度的IL-1β；C组加入最适浓度的Melittin；D组加入最适浓度的IL-1β及Melittin；干预48h后采用Westernblot法检测Ⅱ型胶原表达。结果倒置显微镜观察示，第1代细胞多呈多角形，第5代后细胞增殖能力逐渐减弱，细胞形态向梭形转变。细胞质中的酸性黏液物质（如蛋白多糖）被甲苯胺蓝染成深蓝色。免疫荧光染色标记Ⅱ型胶原后，可见细胞骨架部分呈阳性表达（呈绿色荧光）。MTT法检测示，在干预24、48h后，IL-1β及Melittin对EPCs均有抑制作用，并呈剂量依赖性，最终确定IL-1β及Melittin干预的最适浓度分别为10ng／mL和1．0μg/mL。Westernblot法检测示，与A组比较，B组IL-1β干预后Ⅱ型胶原表达明显减少，C组Melittin干预后Ⅱ型胶原表达明显增加，但D组与A组比较无明显差异。A、B、C、D组Ⅱ型胶原相对表达量分别为0．991±0．024、O．474±0．127、1．913±0．350、1．159±0．297，除A、D组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）外，其余组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论研究表明Melittin具有保护终板软骨作用，为其用于防治脊柱退变性疾病提供了相关实验依据。
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