作者：刘卫华 刘漪沦 刘海荣 罗永慧 徐金眉组织工程角膜脂肪来源间充质干细胞pax6基因诱导分化角膜上皮样细胞小鼠
摘要：目的 探讨应用Pax6基因转染诱导脂肪来源间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells，ADMSCs）分化为角膜上皮样细胞的可行性。 方法取健康5～6周龄C57BL/6小鼠双侧腹股沟脂肪，分离、培养ADMSCs，取第3代细胞进行基因转染。设未转染组（A组）、pcDNA3.1空质粒组（B组）和pcDNA3.1-Pax6重组质粒组（C组），转染48 h后取B、C组进行G418筛选，倒置显微镜下观察细胞形态学改变；Western blot检测各组Pax6蛋白以及角膜上皮细胞特异性标志分子——细胞角蛋白12（cytokeratin 12，CK-12）表达；实时荧光定量PCR检测各组CK-12 mRNA表达。 结果A、B组细胞形态无改变；C组筛选出两类不同形状的细胞克隆，一类呈“铺路石”状，形态类似角膜上皮细胞，命名为筛选克隆1；另一类呈网状，有3～7个细胞突起，命名为筛选克隆2。Western blot检测示，A、B组Pax6蛋白表达均为阴性，C组两类细胞克隆均有Pax6蛋白表达；仅C组筛选克隆1 CK-12蛋白表达为阳性，其余3组均为阴性。实时荧光定量PCR检测示，C组筛选克隆1的CK-12 mRNA相对表达量为8.64 ± 0.73，高于筛选克隆2（0.55 ± 0.42）、B组（1.36 ± 0.40）和A组（1.00 ± 0.00）（P 〈 0.05）；A、B组以及C组筛选克隆2比较差异均无统计学意义（P 〉 0.05）。 结论Pax6基因转染能够诱导小鼠ADMSCs分化为角膜上皮样细胞，同时促进CK-12表达，为组织工程角膜构建提供了一种有效的上皮细胞来源。
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