作者：焦虎 范金财 刘立强 康宁 田佳 甘承 冯苏...组织工程毛囊毛乳头细胞角质形成细胞培养基普通培养基细胞培养
摘要：目的毛乳头细胞被广泛用于组织工程毛囊和皮肤构建。探讨用含血清的角质形成细胞培养基（keratinocyte medium,KM）和普通培养基（normal medium,NM）培养毛乳头细胞的生物学特性差异,以及KM培养的毛乳头细胞是否可用于组织工程毛囊研究。方法采用两步酶消化法从除皱术时切下的头皮标本中分离培养毛乳头,接种后分别采用KM和NM培养毛乳头细胞并传代。记录毛乳头最早贴壁时间及细胞迁出时间,接种5d时统计毛乳头贴壁率。倒置显微镜下观察两组细胞形态学变化,计数第3代细胞每皿聚集体个数 记录细胞最大传代次数 细胞融合成膜后对消化的细胞膜片行HE染色观察。取第3代细胞行MTT法检测细胞增殖 免疫荧光染色和ALP染色观察α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和ALP在两组细胞中的表达,并统计ALP蓝色阳性区域面积。结果KM组毛乳头最早贴壁时间及细胞迁出时间分别为24h及64h,早于NM组的48h及80h。5d时KM组及NM组毛乳头贴壁率分别为54.17%及36.78%。NM组细胞体积较KM组大。NM组第3代细胞每皿形成（3.06±1.12）个聚集体,KM组每皿形成（9.25±1.73）个聚集体,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。KM组细胞融合后细胞膜片行HE染色可见细胞呈多层性 NM组细胞不能多层性生长,未行HE染色观察。NM组细胞最多可传7代 KM组最多可传15代。MTT检测显示KM组细胞增殖迅速,7d后KM组吸光度值明显高于NM组,差异有统计学意义（P〈0.05）。免疫荧光染色显示,两组第3代细胞α-SMA均为阳性。ALP染色显示,NM组第6代细胞中仅少量细胞表达ALP,阳性区域面积为（987±146）μm2 KM组第14代细胞ALP染色仍为阳性,阳性区域面积为（8757±558）μm2 两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论毛乳头细胞在含血清的KM中增殖迅速,聚集生长明显,传代次数增多 用含血清KM培养毛乳头细胞用于组织
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