作者：张晔; 曾炳芳; 张长青; 王建华骨髓间充质干细胞人血管生成素angiopoietin重组真核表达载体限制性内切酶兔mscspcdna3基因mrna免疫印迹杂交蛋白表达dotaprtpcr体外培养基因重组阳性克隆杂交检测组织工程转染可能性骨缺损
摘要：目的探索构建人血管生成素1(human angiopoietin 1,hAng-1)真核表达载体,转染体外培养兔骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs)修复骨缺损的可能性. 方法基因重组和限制性内切酶酶切构建真核表达载体pcDNA3-hAng-1,经脂质体DOTAP介导质粒转染兔MSCs,G418筛选阳性克隆,RT-PCR及免疫印迹杂交检测hAng-1 mRNA及蛋白表达. 结果重组真核表达载体pcDNA3-hAng-1经限制性内切酶Xho-I和BamH-I酶切后,电泳显示1.4 kb hAng-1目的片段和5.4 kb pcDNA3载体片段,转染兔MSCs后,RT-PCR检测出目的基因mRNA,免疫印迹杂交检出hAng-1的蛋白表达. 结论构建的真核表达载体pcDNA3-hAng-1能在转染的兔MSCs中表达,可以为组织工程骨修复奠定基础.
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