作者：赖东波; 毛碧涛; 李茹; 孙新血友病甲血友病乙基因突变测序多重连接探针
摘要：目的对20名血友病甲患者和4例血友病乙患者进行基因诊断。方法 1血友病甲患者FⅧ基因检测：（1）内含子22倒位检测：首先采用长距离PCR（LD-PCR）对患者FⅧ基因内含子22倒位进行检测;（2）内含子1倒位检测：对内含子22倒位突变阴性患者,采用序列特异性PCR进行内含子1倒位突变检测;（3）点突变检测：对内含子22和1倒位突变阴性患者,针对FⅧ基因26个外显子和外显子-内含子交界区设计引物,采用PCR直接测序法检测点突变;（4）大片段缺失检测：对前三步检测阴性的患者,进一步采用多重连接探针扩增技术（MLPA）检测大片段缺失。2血友病乙患者FⅨ基因检测：（1）点突变检测：针对FⅨ基因的启动子、8个外显子和外显子-内含子交界区设计引物,采用PCR直接测序法检测点突变;（2）大片段缺失检测：对点突变检测阴性者,进一步采用MLPA检测大片段缺失。结果 20例血友病甲患者,共检出内含子22倒位8例,内含子1倒位1例,错义突变5例,插入突变1例,大片段缺失1例,剪切突变4例。4例血友病乙患者检测出错义突变2例,缺失伴插入突变1例,大片段缺失突变1例。其中新发现FⅧ基因突变3例（c.1009＋2 C〉T,c.670＋1 G〉C,c.4798delA）,F9基因突变1例（c.938-939indelT）。结论本研究对血友病甲和血友病乙患者的基因诊断阳性率为100%。
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