作者：陈伟; 刘红波中性粒细胞胞外捕获网结核分枝杆菌卡介苗免疫荧光染色激光共聚焦显微成像
摘要：目的建立结核分枝杆菌和卡介苗体外诱导中性粒细胞胞外捕获网形成的方法,为研究中性粒细胞胞外捕获网对结核分枝杆菌的影响提供基础。方法分离健康志愿者外周血中性粒细胞,7H9液体培养结核分枝杆菌标准菌株(mycobacterium tuberculosis,MTB)和卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG),RPMI-1640培养基共培养中性粒细胞和细菌(MTB、BCG)。免疫荧光染色和激光共聚焦显微成像观察NETs生成;Pico Green^■染料定量检测上清游离DNA,反映NETs生成量。结果结核分枝杆菌和卡介苗体外刺激中性粒细胞均可产生大量胞外网状结构,包含DNA、组蛋白(H3Cit)和髓过氧化物酶(MPO),结核分枝杆菌诱导NETs形成的效率明显高于卡介苗。结论成功建立结核分枝杆菌体外诱导NETs的方法,为进一步研究中性粒细胞在抗结核中的作用提供基础。
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