作者：宋亮 张宁 关晓明 陈辉 马迅椎间盘退变髓核间充质干细胞营养增殖凋亡
摘要：目的研究大鼠髓核间充质干细胞（NPMSCs）体外培养的最佳血清体积浓度并探讨椎间盘退变的机制。方法用胶原酶、胰酶序贯消化法从SD大鼠腰部和尾部的椎间盘组织中提取NPMSCs,并进行体外培养,将其传代。①利用流式细胞仪对第3代传代NPMSCs细胞表型CD29、CD34、CD24、CD90、CD105进行鉴定;②利用普通PCR鉴定体外培养的NPMSCs细胞基因Sox2、Nanog的表达;③在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用成骨、成软骨、成脂培养液诱导培养第3代传代NPMSCs,2周以后,用染色剂对其染色,观察其成脂、成骨、成软骨能力。④在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用不同血清体积浓度（0%、5%、10%、20%、30%）的DMEM-F12血清培养液培养第3代传代NPMSCs,72h后利用CCK-8法检测细胞的增殖,并采用RT-PCR检测细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9的mRNA表达,借助流式细胞仪对细胞进行细胞凋亡的检测。结果①大鼠NPMSCs的成骨、成软骨能力强,成脂能力较差,且其细胞表面高度表达CD29、CD90、CD105,低度表达CD24、CD34,细胞基因Sox2、Nanog高度表达。②随着培养液血清体积浓度增加,OD值增大,NPMSCs的凋亡率降低,细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9基因的mRNA表达增加。结论①大鼠NPMSCs具有间充质干细胞特性;②细胞外营养影响大鼠NPMSCs的增殖、分泌、凋亡。
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