作者:许予明; 马兴荣; 唐洲平; 宋波; 张博爱; ...碱性成纤维细胞生长因子分子克隆逆转录聚合酶链式反应
摘要:目的构建pcDNA3碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)真核表达质粒,为进一步开展bFGF基因治疗中枢神经疾病奠定基础.方法建立SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增脑细胞中bFGF基因;载体和RT-PCR产物经BamHI和EcoRI酶切,纯化,T4DNA连接酶连接,转化大肠杆菌,抗生素筛选重组质粒.结果 RT-PCR产物为649bp特异片段,pcDNA3咄FGF重组体菌落PCR产物为649 bp特异片段,测序分析为bFGF基因片段.结论经RT-PCR反应得到特异的bFGF基因片段,并成功构建了大鼠bFGF真核表达载体.
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