作者：秦文华; 付春景细胞周期蛋白a2正义反义真核表达载体
摘要：目的构建小鼠cyclinA2的正义和反义真核表达载体。方法采用小鼠胚胎组织取材，提取总RNA。设计引物，采用RT—PCR方法扩增小鼠cyclinA2mRNA得到cyclinA2的DNA，将此DNA插入pGEM—T载体，转化人JM109感受态细菌。将鉴定得到的重组质粒进行扩增，EcoRI酶切后，回收cyclinA2目的片段亚克隆人pcDNA3．1真核表达载体。酶切筛选鉴定重组的真核表达载体pcDNA3．1-cyclinA2。结果将小鼠基因的开放阅读框（ORF）重组到真核表达载体pcDNA3．1内，用EcoRI酶切重组质粒后可得到一接近1660bp的DNA条带。核酸测序证实和GenBank所公布序列相符。HindⅢ酶切鉴定重组质粒后，证明分别为正向和反向插入载体的质粒。DNA测序证明构建的真核表达载体pcDNA3．1-cyclinA2的序列是正确的。结论成功构建了小鼠cyclinA2的正义和反义真核表达载体。
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