作者：孙晓东; 周志伟; 万德森; 王国强; 方淯清...枯否细胞分离培养鉴定
摘要：目的研究BALB／c鼠肝枯否细胞分离、培养和鉴定。方法选用健康雌性8—10w龄鼠，麻醉无菌取肝，D—Hank’s液注射冲洗去血并剪去部分结缔组织，剪碎肝组织，加入链霉蛋白酶E和Ⅰ型胶原酶，水浴振荡消化，再加入DNase Ⅰ，共同消化。不锈钢筛网滤过，用0．005％DNase Ⅰ的1640液清洗细胞液，加Tris—NH4CL溶解红细胞。50％-70％Percoll梯度离心，用含10％FCS的RPMI-1640贴壁培养4—6h洗去非贴壁细胞。通过吞噬墨水实验鉴定枯否细胞。结果枯否细胞的数量为（1．07±0．87）×10^7／g，贴壁率40．3％，用0．4％台盼蓝染色鉴定，细胞存活率在95％以上，吞噬实验发现90％的贴壁细胞具有吞噬功能，即KC的纯度可达90％。贴壁的枯否细胞的形态多样，已经完全伸出了伪足并且伸展贴壁，呈多边形、多角形或者梭形等不规则形状，并且胞浆内可见吞噬的微粒状物质。结论酶消化水浴振荡法结合梯度离心和贴壁培养是分离BALB／c鼠枯否细胞的可靠方法，为进一步实验打下了基础。
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