作者：王卉; 冯甜甜; 王冰蕊; 任思蕊; 张玲玲; ...lncrna单细胞pcr
摘要：CRISPR/Cas9技术可简便、快捷、高效地实现基因的敲除。敲除长非编码RNA（long noncodingRNA,lncRNA）时需同时引入1对guideRNA,将lncRNA基因组的全部或者大部分片段敲除,以实现目的基因功能的缺失。现有鉴定lncRNA敲除细胞株所用的方法一般需单细胞增殖至较多数量,敲除效率较低且筛选耗时耗力。LncRNA DANCR（differentiation antagonizing non-protein codingRNA）在干祖细胞的干性维持过程中起重要作用,且与多种癌症的发生有关,但其作用机制仍未完全明确。作者针对DANCR基因组的3′及5′端设计sgRNA并同时转染到人红白血病细胞系（K562）中。为建立一种高效筛选鉴定lncRNA敲除细胞株的方法,他们先后采用了基因组DNA PCR、少量细胞PCR、单细胞PCR这3种方法来鉴定lncRNA DANCR的敲除情况,系统比较了3种检测方法的优缺点。该文成功建立了利用单细胞PCR技术高效筛选鉴定CRISPR/Cas9介导的lncRNA敲除克隆细胞株的方法。这一方法适用于其他lncRNA敲除情况的鉴定,有助于lncRNA的功能及机制研究。
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