作者：张明智; 王梦鸽; 王洪涛; 苏培; 刘鑫; 张...meis1crisppucas9icas9基因敲除hek293t细胞
摘要：CRISPR/Cas9是新一代基因组编辑技术, 可简便快捷地在哺乳动物细胞对基因进行敲除、敲入。但常规的CRISPR/Cas9表达系统直接转染效果差、病毒包装效率低, 极大地限制了CRISPR/Cas9系统的广泛使用。该研究应用Tet-on系统, 建立了Dox诱导Cas9表达的293T细胞株,命名为293T-iCas9。MEIS1（myeloid ectropic viral integration site 1）是TALE（three amino acid loopextension）同源域家族的转录因子, 其在白血病发生发展、胚胎造血系统发育及神经系统发育中有重要作用, 但其作用机制仍未完全明确。将靶向MEIS1 Exon3的sgMEIS1表达载体转入293T-iCas9,SURVEYOR实验和Western blot检测结果表明, sgMEIS1有效地指导Cas9进行基因组编辑。最终经测序和Western blot结果证明, 成功建立了MEIS1敲除细胞株, 这为研究MEIS1的功能提供了重要的工具。
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