作者：刘戈飞; 黄东阳; 杜晶; 崔泽实; 宋今丹全反式视黄酸人肝脏表达细胞活性
摘要：应用杆状病毒蛋白表达系统在Sf9细胞中对人肝脏辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase／reductase，NRDR)进行表达。以纯化的重组蛋白质为材料，分析NRDR的催化活性和酶促反应性质。结果证实，人肝脏NRDR具有视黄醛还原酶活性，在辅酶Ⅱ存在条件下其催化视黄醛还原成视黄醇的Km值和Vmax值分别(2．8±0．24)μM和(0．468±0．036)μmol／(min．mg)。构建删除和不删除羧基端过氧化物酶体定位信号SRL序列的NRDR绿色荧光蛋白报告基因表达载体。转染HeLa细胞后，应用免疫荧光双染色的方法分析NRDR细胞内定位。结果表明NRDR定位在细胞内过氧化物酶体。羧基端SRL序列对NRDR定位到过氧化物酶体是必需的，删除SRL序列的NRDR分布在细胞质中。因此，人肝脏NRDR是存在于过氧化物酶体中的辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶。
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