作者：高丰厚; 郑佐娅; 王鸿利; 洪理泉; 王丛珠...免疫反应性
摘要：目的克隆与表达具有稳定免疫反应性的肌钙蛋白TnI(28-110aa)片段.方法 (1)PCR 从心脏cDNA 中扩增TnI(84-330bp)与PGEX-4T-3/TnI(84-330bp)表达载体的构建;(2)IPTG诱导BL21-PGEX-4T-3/TnI(84-330bp)表达,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)判定pGEx-4T-3-TnI84-330bp融合蛋白的表达情况,并经蛋白质印迹试验(Western Blotting)对表达产物进行验证.谷胱甘肽Sepharose-4B亲合层析柱纯化目的蛋白.结果 PCR扩增出 TnI(84-330bp)基因,将该基因正确地克隆到表达性载体质粒pGEX-4T-3中;可溶性表达的目的蛋白多于包涵体;肌钙蛋白I单抗能识别融合蛋白,而与GST 蛋白不发生交叉反应.结论成功构建了能在BL2l中高效表达的PGEX-4T-3/TnI(84-330bp)质粒,表达的目的蛋白有特异免疫反应性.
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