作者：吴晓燕; 李小四; 冯雪君; 李胜兵; 宋国蓉...艰难梭菌酶联免疫荧光法聚合酶链反应
摘要：目的通过对艰难梭菌培养及毒素检测方法比较,建立艰难梭菌培养联合酶法检测毒素蛋白(A/B)的检测流程,评估其临床应用。方法收集 2015 年-2017 年住院腹泻患者粪便标本 852份,采用显色培养法( ChromID^TM)培养艰难梭菌,阳性菌株用酶联免疫荧光法检测其毒素蛋白A/B( Clostridium difficile toxins A and B,CDAB);用酶联免疫荧光法检测毒素蛋白A/B及阳性菌株,用PCR方法检测其tcdA和(或)tedB基因进行比较,运用检出率、灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值进行效能评价。结果852 例粪便标本经显色培养共分离菌108株,粪便直接酶法A/B毒素蛋白检出率为5.99%(51/852);阳性菌株联合酶法检测A/B毒素蛋白检出率为10. 92%(93/852);108株阳性菌株联合PCR方法93株表达tcdA^+tcdB^+;6株表达tcdA^-tcdB^+;9株未表达,为tedA^-tcdB^-;阳性菌株用酶法检测毒素蛋白A/B结果93株阳性,15株阴性,且93株阳性经PCR检测基因均表达tedA^+tcdB^+;以PCR检测艰难梭菌毒素基因作为参考方法,培养阳性菌株联合酶法、粪便直接酶法检测毒素蛋白A/B的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为93. 94%、100%、100%.60%和51.52%、100%、100%、15. 79%;致性检验Kappa值分别为0.721和0. 150。结论显色培养后阳性菌株联合酶法检测艰难梭菌毒素蛋白A/B可以提高艰难梭菌检出率,与PCR毒素基因检测有较好一致性,操作简单,具有较好的临床应用价值。
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