作者：张旭敏; 范慧敏; 汪进益; 刘中民; 张文杰生肌调节因子连接蛋白43基因转染成纤维细胞心力衰竭
摘要：目的 通过观察转染生肌调节因子（myoblast determination，MyoD）基因和连接蛋白43（Connexin）基因的大鼠真皮成纤维细胞（demml fibroblast，DFs）生物学功能的变化，探讨Myo和Cx43基因转染DFs细胞的意义。方法采用Gateway技术，构建真核质粒表达载体，利用慢病毒（LV）表达系统，将大鼠MyoD cDNA和Cx43 cDNA转入大鼠成纤维细胞中，经Blasticidin筛选培养，通过RT-PCR，Western blot及膜片钳技术等方法检测MyoD及Cx43 mRNA及蛋白表达，并检测离子电流变化，通过显微镜观察转染后生长情况，免疫组织化学检测肌动蛋白和结蛋白的表达。结果RT-PCR，Westem blot检测出MyoD及Cx43的mRNA及相应蛋白表达，膜片钳检测到转染后钙离子电流，显微镜观察到基因转染筛选后，培养1周细胞的融合现象，并有多核肌管形成。免疫组织化学检测可见其下游蛋白Desmin及α-actin呈现阳性表达。结论MyoD和Cx43基因转染使DFs分化为成肌细胞，为进一步研究基因治疗心力衰竭奠定基础。
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