作者：赵亮 付勤组织工程藻酸钙凝胶脂肪干细胞转化生长因子软骨
摘要：目的将有促进软骨细胞增值作用的TGF-β1与藻酸钙凝胶有机结合，探索组织工程合适载体，了解TGF-β1对体外培养的藻酸钙凝胶中脂肪干细胞向软骨细胞诱导分化的作用，为关节软骨缺损的修复提供实验依据。实验材料6周龄Wister大鼠（250g-300g），雌雄不限，（中国医科大学实验动物中心提供）；高糖DMEM培养基（Gibco，美国）；Ⅰ型胶原酶（Sigma，美国）；鼠尾胶原（杭州生友生物技术有限公司）；地塞米松，ITS＋，牛血清白蛋白，维生素C（Sigma，美国），转化生长因子β1（Pepro Tech，美国）；藻酸钙凝胶，Ⅱ型胶原多克隆抗体，SABC免疫组化试剂盒（武汉博士德生物科技有限公司）；SRK LYOVAC GT2-9冷冻干燥机（德国）。实验方法取大鼠双腹股沟脂肪组织。剪碎，消化，基础培养基终止消化，离心，弃上清，再用基础培养基重悬细胞，接种，培养。20h后首次换液，以后3d／次换液1次，7～10d达到80％-90％融合时首次传代。取传到第4代的脂肪干细胞，消化，基础培养基重悬。接种于藻酸钙凝胶，24h将基础培养基半量换成诱导培养基（转化生长因子β150mg／L），再过24h后全量换为诱导培养基，此后3d／d换液1次。实验结果①细胞增殖检测：接种细胞后增殖，随着时间延长MTT值升高；②大体及显微镜观察：随着时间的延长，细胞逐渐布满整个空隙，并有基质分泌，细胞被包埋于其分泌的基质中，细胞与细胞之间，细胞与载体之间紧密结合；③HE染色：培养3周后HE染色可见大量的细胞外基质产生，细胞与细胞间以及细胞于载体问相互间紧密联结；④电镜观察：细胞黏附于藻酸钙凝胶上，细胞伸展，生长良好，细胞被包埋在其分泌的基质中；⑤Ⅱ型胶原免疫组化检测：载体复合物Ⅱ型胶原呈阳性。结论1．藻酸钙凝胶对细胞的培养是三维培养，藻酸�
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