作者：蒋林栋; 李劲峰; 马源; 李成; 李月白; 王...基因转染降钙素基因相关肽nih3t3成纤维细胞
摘要：目的：检测降钙素基因相关肽基因（CGRP）和沉默过氧化物酶体增殖子活化受体-γ（PPARγ）共转染NIH3T3成纤维细胞中的表达。方法培养 NIH3T3成纤维细胞，收集细胞随机分为五组，正常组：正常培养细胞，不做特殊处理，作为正常对照；空载体组：仅用空载体 pGFP-V-RS 质粒转染细胞，作为阴性对照组；CGRP 组：用重组载体 pGFP-V-RS-exCGRP 质粒转染细胞；siPPARγ组：用重组载体 pGFP-V-RS-siPPARγ质粒转染细胞；双基因组：用重组双基因载体 pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP 质粒转染细胞。电转染成功后，继续培养细胞48 h，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）与蛋白质免疫印迹法（Western blot）分别检测各组细胞内 PPARγ、CGRP mRNA 与蛋白的表达。结果双基因组中 CGRP 基因呈高表达，明显高于正常组、空载体组、siPPARγ组，差异均有统计学意义（P ＜0.05）；与 CGRP 组中 CGRP 基因表达量相近，差异未见统计学意义（P ＞0.05）。双基因组细胞中 PPARγ基因呈低表达，明显低于正常组、空载体组、CGRP 组，差异均有统计学意义（P ＜0.05）；与 siPPARγ组细胞中 PPARγ基因表达量相似，差异未见统计学意义（P ＞0.05）。结论促进成骨基因和抑制成脂基因共转染 NIH3T3成纤维细胞，能够上调细胞中 CGRP 基因表达，同时下调 PPARγ基因表达。
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