作者：申栋帅; 杨亚军; 刘希望; 孔晓军; 秦哲; ...阿司匹林丁香酚酯血小板聚集蛋白质印迹法
摘要：将空白血小板样品分为8组,包括溶剂对照组以及模型组、阿司匹林组、丁香酚组、联合给药组、阿司匹林丁香酚酯（aspirin eugenol ester,AEE）低剂量组、AEE中剂量组和AEE高剂量组这7个处理组。各组加入对应的药物,并在37℃孵育3min,而后各处理组加入血小板激活剂二磷酸腺苷（ADP）,并于37℃孵育5min,从而激活血小板。最后,通过ELISA检测试剂盒分别对血小板胞内cAMP含量变化以及血小板ATP释放量进行测定;利用荧光分光光度法以及钙离子特异结合的荧光探针Fura-2/AM对血小板胞内钙离子浓度（[Ca^（2＋）]i）进行测定;通过蛋白质印迹法（Western blot）对血小板胞内Akt、ERK、JNK以及P38蛋白磷酸化程度进行测定。结果显示,AEE各组及其前药对照组均能显著降低胞内钙离子浓度以及ERK蛋白磷酸化（P〈0.05）,但对胞内cAMP含量变化以及JNK、P38和Akt蛋白的磷酸化过程无显著性影响（P〉0.05）。此外,不同浓度AEE均可显著降低血小板ATP释放量（P〈0.01）,而阿司匹林、丁香酚以及两者联用则均无显著性影响（P〉0.05）。在终浓度为25μmol/L时,AEE的降钙作用以及抑制ERK2蛋白磷酸化作用效果均优于其前药对照组,且该浓度下AEE能够显著降低血小板ATP释放量（P〈0.01）。由此可见,AEE通过降低血小板胞内钙离子含量和ATP释放量,以及抑制ERK2磷酸化从而抑制ADP诱导的血小板聚集,且相比于其前药增加了降低血小板ATP释放量这一新的作用途径。
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