作者：朱伟宁; 王金磊; 陈凯; 黄思扬; 朱兴全弓形虫真核表达质粒免疫保护小鼠
摘要：旨在构建弓形虫磷脂酰苏氨酸合成酶（Toxoplasma gondii phosphatidylthreonine synthase，PTS）基因DNA疫苗，评价其抗弓形虫的免疫保护力。利用RT—PCR技术扩增得到弓形虫PTS基因，构建真核表达质粒pVAX-取PTS，然后转染HEK293-T细胞，分析pVAX-TgPTS在细胞中的表达情况。利用真核表达质粒pVAX—TgPTS对BABL／c小鼠进行3次免疫，并用空质粒pVAX1作为对照，在每次免疫前和第3次免疫后2周收集小鼠血清。经ELISA方法检测小鼠血清中的IgG水平。第3次免疫后2周每组取3只小鼠，将其剖杀取脾脏，CCK-8法检测牌淋巴细胞增殖能力，流式细胞仪测定CD4＋和CD8＋T细胞百分比。小鼠脾细胞经STAg刺激后，利用ELISA试剂盒检测脾细胞细胞因子的表达情况。第3次免疫后2周，每只小鼠腹腔注射l000个弓形虫RH株速殖子，观察记录小鼠的存活时间。结果显示，pVAX-TgPTS能够在HEK293-T细胞中表达；第3次免疫后2周pVAX-TgPTS组血清中IgG含量相比对照组有了显著提高；pVAX—TgPTS组淋巴细胞刺激指数（SI）略微高于对照组；CD4＋和CD8＋T细胞百分比含量明显高于对照组；pVAX TgPTS组中脾细胞经STAg刺激后能够明显提高IFN-7的表达量。攻虫试验结果表明，pVAX—kPTS组小鼠存活时间比对照组明显增长。本试验成功构建真核表达质粒pVAX-TgPTS，证明pVAX—TgPTS能够诱导小鼠产生一定的体液免疫和细胞免疫反应，并对弓形虫感染产生一定程度的免疫保护力，该研究结果为进一步研发弓形虫核酸疫苗奠定基础。
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