作者：鲁海冰; 王明月; 朱利塞; 刘亚静; 郭昌明...羊肠道病毒单克隆抗体g种肠道病毒
摘要：根据本实验室分离的国内首株羊肠道病毒CEV—JL14的核苷酸基因组序列，设计并合成了羊肠道病毒VP1基因的引物，并应用RT—PCR扩增了VPl基因片段。扩增的VP1基因片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoRI／BamHI的酶切位点。重组质粒经酶切鉴定和序列测定正确后，转化到BL21，并以IPTG诱导表达了VP1重组蛋白。重组蛋白纯化后以弗氏完全佐剂乳化，按一定的程序免疫BALB／c小鼠，加强免疫3次后，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经过3次亚克隆获得了5株表达VP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。以ELISA对杂交瘤分泌的IgG亚类进行了鉴定，结果4株为IgG1亚类，1株为IgG2b。以免疫酶单层细胞技术鉴定了单克隆抗体，结果显示，获得的单克隆抗体可以特异性检出羊肠道病毒抗原。本试验在国内首次获得了抗羊肠道病毒的单克隆抗体，将为羊肠道病毒的致病机理、诊断及流行病学研究奠定基础。
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