作者：张亚宁; 赵利峰; 张乐祎; 赵宝华绵羊肺炎支原体mop30基因黄色荧光蛋白真核表达瞬时表达转基因植物疫苗
摘要：以绵羊肺炎支原体（Mycoplasma oumvipneoniae,MO）标准株Y98基因组为模板,设计1对特异引物,PCR扩增得到798bp的P30目的基因（MOP30）,将其定向克隆到pMD19-T Simple载体中进行测序分析。重组质粒进行XbaⅠ/BamHⅠ双酶切并回收目的片段,将目的基因亚克隆入黄色荧光蛋白（yellow fluorescent protein,YFP）表达载体pCAMBIA1300-YFP中构建重组融合表达质粒pCAMBIA1300-MOP30-YFP。双酶切验证后的融合表达质粒转化农杆菌（Agrobacterium）感受态细胞,侵染烟草（tobacco）叶片。通过激光共聚焦成像显微镜（cofocal imagingmicroscope）观察到融合表达的黄色荧光蛋白,Western-blotting试验得到57 000的特异条带,RT-PCR检测到MOP30基因在烟草叶片中转录。MOP30-YFP融合蛋白在烟草中的成功表达,为转基因植物疫苗防治绵羊支原体肺炎奠定了基础。
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