作者：刘铀; 毕英佐; 曹永长; 马静云; 肖俊芳新城疫病毒t4噬菌体hn蛋白展示
摘要：用RT-PCR扩增新城疫病毒(NDV)hn基因,得到大小约1 700bp的片段,将其克隆至pGEM-T easy载体并测定其核苷酸序列.根据测序结果,另设计1对引物带有EcoR I限制位点,用PCR扩增基因主要功能区即编码HN蛋白球状头部的hngd片段,将其分别克隆至pSOC和pR质粒soc基因3'端,重组质粒pSOC-HNGD转化E.coli BL-21(DE3)感受态细胞,以终浓度1 mmol/L的IPTG诱导表达,在SDS-PAGE凝胶上检测到相对分子质量大小约67 000的目的蛋白条带.随后将重组质粒pR-HNGD转化T4宿主菌E2感受态细胞,阳性克隆用溶菌酶缺陷的T4-Z1感染,用不加溶菌酶的SC平板筛选阳性克隆.经PCR鉴定,hngd片段已整合在T4-Z1的基因组中.纯化后的重组噬菌体T4-Zl-HNGD用SDS-PAGE和Western-blot可检测到67 000的特异条带.结果表明,HNGD蛋白成功展示在T4噬菌体衣壳表面,且与NDV抗血清具有良好的反应性.
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