作者：张万坡; 程国富; 谷长勤; 李德学; 宋念华...原位杂交禽流感病毒mdck细胞
摘要：根据已知禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)核蛋白(NP)基因序列,选取其中保守区域设计出1对引物,以RT PCR方法扩增出543 bp的NP基因片段,采用地高辛标记制备探针.MDCK细胞人工感染H9N2亚型禽流感病毒后,不同时间取样制备细胞涂片,进行原位杂交,研究了禽流感病毒对MDCK细胞的感染,探讨了原位杂交的条件及其应用于检测AIV感染的可行性.结果显示,感染24 h后,原位杂交可检测出细胞内的病毒RNA,并且杂交信号的强度与感染时间的长短有关.研究表明,原位杂交检测禽流感病毒,不但能很好地表现病毒和细胞的位置关系,而且具有较好的特异性和灵敏性,为禽流感病毒的组织原位杂交检测奠定了实验基础.
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