作者：韩烨; 周志江; 张玉静细胞粘附dna序列相关萘啶酮酸琼脂平板dna片段blast核苷酸序列变异体质量浓度志贺毒素acid融合基因寡核苷酸设计合成分子伴侣真核细胞转座子菌株pir受体菌插入试验接合
摘要：将产志贺毒素大肠杆菌O157:H7菌株97094培养于含有不同质量浓度的萘啶酮酸(nalidixic acid,NA)的麦康凯(MacConkey)琼脂平板上,获得对NA有抗性的菌株.用含有自杀性质粒pRT733的供体菌SM10λpir(携带转座子TnphoA)和抗萘啶酮酸的97094菌株做接合试验,使转座子TnphoA转入受体菌97094,经过约200个接合试验,有503个菌株在含有Km、NA、XP的LB琼脂平板上形成蓝色菌落,说明在这些菌株中形成了phoA融合基因,并能表达phoA基因.在这503个Kmr,NAr变异体中,有6株完全失去了对HEp-2细胞的局灶型粘附(local adherence,LA)现象.对构建的6株大肠杆菌O157 TnphoA变异体,克隆TnphoA及其两侧的大肠杆菌O157 DNA序列,用根据TnphoA融合接点处的phoA的DNA序列设计合成的寡核苷酸引物,对各克隆中TnphoA上游的大肠杆菌O157的DN段部分进行测序,测序结果做BLAST搜索,发现有4个变异体的TnphoA插入到已知的大肠杆菌O157紧密素基因eae中,有2个变异体的TnphoA分别插入到eae之外的核苷酸序列中,分别插入到一个功能未知的菌毛分子伴侣基因和一个功能未知的Z4182基因的上游.这项研究表明,除紧密素外,大肠杆菌O157尚有其他因子参与对真核细胞的粘附.
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