作者：葛丽; 李震; 于瑞嵩; 刘惠莉; 张德福; 周...毕赤酵母干扰素基因分泌表达分泌型表达载体western猪重组菌株表达产物pcr鉴定抗病毒活性基因克隆浓度梯度诱导表达page印迹杂交blot融合蛋白试验检测细胞毒性培养基电转化转化子高抗性抗生素
摘要：将猪α干扰素(PoIFN-α)基因克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,电转化毕赤酵母KM71H菌株,抗生素ZeocinTM浓度梯度筛选高抗性转化子,以PCR鉴定阳性重组菌株.筛选出的高拷贝重组菌株分别通过BMGY/BMMY培养基和YPG培养基,用甲醇诱导表达.SDS-PAGE和Western blot印迹杂交结果证实,表达产物为重组PoIFN-α融合蛋白,经细胞毒性试验检测(WISH/VSV系统),表达产物的抗病毒活性为4.1×104IU/mL.
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