作者：吕文平; 许梓荣; 李卫芬; 孙建义; 韩晋辉葡聚糖酶基因芽孢杆菌淀粉液化克隆和表达genbank相对分子质量pcr克隆blast基因工程菌重组表达最适温度基因组氨基酸等电点同源性基因库双酶切特性表酶活ph值耐热性全长bp栽体
摘要：提取淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)基因组,通过PCR克隆了该菌的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因全长.结果显示,该基因全长843 bp,ORF为717 bp,编码239个氨基酸,计算相对分子质量为26 800,等电点为6.07.经Blast分析,该序列与基因库中的淀粉液化芽孢杆菌(M15674)同源性最高(97%).该基因已被GenBank接受(AY205562.1).用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切目的片段和表达载体pET-30a(+)后相连接,构建了重组表达载体pET-amy,并导入BL21细菌中表达,酶学特性表明:SDS-PAGE电泳在26 000左右有表达蛋白带,该工程菌总酶活这90.74 U/mL,是出发菌的3倍,最适温度在60℃左右,pH值在4～10之间.该工程菌可作为酶活高的理想材料,用以构建耐热性好和酶活高的杂合基因工程菌.
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
