作者：陆凤花; 石德顺; 房慧伶; 韦英明; 杨素芳...成纤维细胞颗粒细胞血清核细胞处理培养fb水牛囊胚发育率胞质
摘要：系统探讨了水牛体细胞核移植的各种影响因素,并初步建立了水牛体细胞核移植的一整套程序.体外成熟培养22～24 h的水牛卵母细胞去核后,将经血清饥饿(0.5%FBS)培养2～9 d、0.1 mg/L Aphidicolin(APD)培养+0.5%FBS培养2～9 d或一般培养法(10%FBS)培养的水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞,直接注射到去核的卵母细胞质中,或注射到卵周隙中再经电融合(100 V/mm,15μs,电脉冲3次)构建重构胚.重构胚经化学激活后(5μmol/L离子霉素5 min,2 mmol/L 6-DMAP 3 h)培养7～8 d,评定其胚胎发育能力.耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0.1 mg/LAPD+0.5%FBS培养处理后的重组胚卵裂率,均极显著高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞(P＜0.01),但囊胚发育率无显著差异(P＞0.05).耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0.1 mg/L APD+0.5%FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均无显著差异(63.06%比58.70%,P＞0.05).以水牛颗粒细胞为核供体时,电融合法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法(P＜0.05),囊胚发育率无显著差异(P＞0.05).培养3代和6代的水牛颗粒细胞以及培养6代和10代的耳皮成纤维细胞,其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异(P＞0.05);以这2种细胞不同培养代数作供体进行核移植时,各代之间核移胚的体外分裂率、囊胚发育率无显著差异P＞0.05).这些结果表明:(1)水牛耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经培养传代所建立起来的细胞系相对比较稳定;(2)0.1 mg/L APD预培养处理供体细胞能提高水牛体细胞核移植的效果,但血清饥饿培养则无作用;(3)水牛耳皮成纤维细胞和颗粒细胞均可作供核细胞,核移植后都能得到体细胞克隆的囊胚,但前者的效果略优于后者,且其核移植效果不受供核细胞培养代数的影响;(4)电融合核移植胚胎的发育率高于胞质内直接注入法,但两者的总体效率相似.
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