作者：郭玉广; 高崧; 刘秀梵断奶仔猪腹泻水肿病大肠杆菌f18菌毛a因子单克隆抗体研制技术
摘要：以表达F18ac菌毛参考菌株2134(O157:H19)为研究对象,摸索出了F18ac菌毛表达的最佳条件,采用热洗脱法获得了较纯的F18ac菌毛,并以之免疫小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,用直接玻板凝集法筛选出1株杂交瘤细胞株19B4,能稳定分泌针对F18ac菌毛和F18ab菌毛共同抗原表位a因子的单克隆抗体.细胞培养上清对F18ac菌毛参考菌株2134和F18ab菌毛参考菌株107/86的直接凝集价均可达1:8,腹水单抗直接凝集效价可达1:1 024,而与猪源产F4、F5、F6和F41粘附素大肠杆菌菌株、鸡源产Ⅰ型菌毛大肠杆菌菌株及沙门氏菌不发生凝集反应.免疫印迹试验结果显示,腹水单抗可同时特异识别F18ac菌毛17 000和F18ab菌毛15 000左右的主要亚单位多肽.应用所研制的单抗对215株断奶仔猪腹泻大肠杆菌分离株进行了检测,结果上述分离株TSB培养物的F18菌毛的检出率为13.4%,TSA培养物的检出率为8.4%.F18菌毛阳性分离株的O血清型除了常见血清型O139、O141外,还有非常见血清型O107、O131和O9等.TSB培养物的F18菌毛检出率明显高于TSA培养物的检出率,表明F18菌毛在TSB培养基中比在TSA培养基上更容易表达,TSB培养基是适合F18菌毛检测、流行病学调查的培养基.
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