作者：卢强; 丰培金; 李莲瑞; 付宝权; 刘明远有丝分裂原鲤鱼外周血白细胞cdna文库
摘要：利用Stratagene公司HybriZAP-2.1建库试剂盒构建了经有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库.采取健康鲤鱼外周血,分离白细胞,经LPS、PHA和ConA分组作用不同时间后,分别提取总RNA,将各组样品混合后,以Oligo(dT)纤维素柱分离纯化mRNA,经逆转录合成cDNA的第1链和第2链,与EcoRI接头连接,酶切后,用CHR0MA SPIN-400柱离心层析纯化,与HybriZAP-2.1载体连接,体外包装后转染E.coli XLI-Blue宿主菌,进行滴度测试和文库扩增.结果构建的经有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库原始库容量为1.67×106pfu,插入片段长度在0.4×103～3.0×103bp,重组率为98.9%,扩增后的文库滴度为6.16×109pfu/mL,该文库符合cDNA文库构建的标准,为克隆和研究鱼类免疫应答相关基因提供了有效的工具.
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