作者：孙兆增; 张玉静; 展德文; 张艳宇; 连继勤鼠层粘蛋白克隆表达细胞基质信号分子
摘要：从鼠的肝脏组织中提取总RNA,采用RT-PCR获得了鼠层粘蛋白(laminin)α5链的E3(LG4-5)、LG4和LG5等 3个基因片段,与NCBI数据库参考序列相比,同源性在99%以上.将E3(LG4,5)、LG4和LG5定向克隆到原核高效表达载体Pet-28a中,构建Pet-28a-E3、Pet-28a-LG4、Pet-28a-LG5等3个原核表达质粒.将表达质粒转化表达受体菌BL21中,IPTG诱导表达.收集菌液进行SDS-PAGE电泳、Western-blotting分析,结果显示,这3段基因在原核细胞中成功表达,薄层扫描显示表达蛋白占细胞总蛋白的20%以上.大量提取包涵体,纯化后免疫家兔,8周后得多克隆抗体,间接ELISA在抗体稀释到1:12 800时仍为阳性.
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