作者：李升锦; 周向东黏蛋白类黏蛋白5ac中性粒细胞弹力酶
摘要：目的探讨中性粒细胞弹力酶（neutrophil elastase，NE）诱导气道黏液上皮细胞呼吸道黏蛋白（MUC）5AC产生和mRNA表达以及MUC5AC基因顺式调控元件特殊蛋白-1（specificity protein，Sp-1）在该基因转录调控中的作用。方法2006年3月至9月，在重庆医科大学病毒性肝炎研究所采用酶联免疫吸附试验（EUSA）和反转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法分别检测培养细胞经0，10，50，100nmol／LNE刺激诱导5，10，30min后上清液MUC5AC质量浓度和细胞中MUC5AC mRNA表达水平。应用定点突变技术，在重组质粒的基础上建立MUC5AC启动子区Sp-1结合位点和核转录因子（NF）-κB结合位点单独突变体，并测定NE刺激的转染细胞荧光素酶相对活性。结果（1）10，50，100nmol／LNE处理A549细胞30min，相同时间点不同浓度NE组MUC5AC蛋白表达水平分别与对照组比较差异均有显著性意义（t=3．406～20．909，均P〈0．05），且呈剂量依赖的趋势（P〈0．01）。（2）100nmol／L NE处理30min后A549细胞MUC5AC mRNA相对表达量明显高于对照组（t=10．299，P〈0．01）。（3）NE可诱导含有启动子序列-324bp的重组质粒荧光素酶相对光强度（1．430±0．042）及pGL3E—MUC5ACNF—κB—MU荧光素酶相对光强度（1．570±0．071）增加，与未经NE诱导的未突变对照组相对光强度（0．799±0．051）相比差异具有显著性意义（t=25．675，t=11．110，P均〈0．01），而NE不能诱导pGL3E—MUC5AC—Sp-1-MU荧光素酶表达增加（P〉0．05）。结论NE可诱导A549细胞MUC5AC产生及其mRNA表达；MUC5AC基因启动子顺式作用元件下游Sp-1位点在NE诱导MUC5AC基因表达机制中起重要作用。
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