作者：宋利娜; 滕蔓; 郑鹿平; 李会珍; 朱志坚; ...马立克病马立克病病毒单克隆抗体ipma
摘要：以纯化的经鸡胚成纤维细胞（CEF）培养的马立克病病毒（MDV）超强毒株GX0101病毒粒子作为免疫原，制备特异性识别MDV的单克隆抗体。GX0101感染CEF后第96小时收集细胞并反复冻融3次，离心取上清，选用100ku的切向流超滤离心管浓缩，浓缩液通过Sepharose 4 Fast Flow（4FF）凝胶作为层析介质分离纯化MDV病毒粒子，聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR分析不同收集峰MDv病毒含量，并经过透射电子显微镜观察到直径约100nm的MDV病毒粒子。进一步用100ku的切向流超滤离心管浓缩,制备峰尖病毒浓缩液，以此免疫雌性BALB／c小鼠制备单克隆抗体。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）和Western—blot筛选,最终获得107个阳性克隆。由其中1株强阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株1082制备的单克隆抗体腹水1PMA效价为1：2．56×10^6。本研究结果为后续MDV单克隆抗体的筛选、鉴定及诊断试剂研发奠定了重要基础。
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