作者：何栋; 卢刚; 罗霭剑; 孙凌霜; 贾坤; 沈丹...马流感病毒np基因原核表达间接elisa
摘要：采用RT-PCR方法从马流感病毒（EIV）分离株A/马/黑龙江/13（H3N8）扩增得到NP基因片段,将其克隆到pET-32a（＋）构建表达质粒pET-NP,测序正确后转化表达菌株Rosetta（DE3）,经IPTG诱导表达、镍柱纯化获得目的蛋白,将获取的重组NP蛋白作为抗原包被,通过优化条件建立检测马血清中EIV抗体的ELISA方法。结果显示,在25℃、IPTG浓度为0.8 mmol/L的诱导条件下,目的蛋白在上清中可溶性表达且表达量最大。以重组NP为抗原建立的ELISA方法仅与马流感病毒阳性血清发生反应,而与马鼻肺炎病毒、马传染性贫血病毒及马红球菌的阳性血清均无交叉反应,具有较高的特异性;与HI试验相比,该ELISA方法有更高的敏感性;批间与批内的变异系数均在15%以下,具有良好的稳定性。该检测方法的建立可以为我国马流感血清学的检测提供有效手段。
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