作者：岳东梅; 王金磊; 黄思扬; 朱兴全; 王春仁大片吸虫表达诊断候选抗原
摘要：为鉴定大片吸虫α-微管蛋白基因（FgAT）,并分析其作为诊断抗原的可行性,根据肝片吸虫的基因组及转录组数据设计α-微管蛋白基因的扩增引物,以大片吸虫总RN A为模板,通过RT-PCR获得大片吸虫的FgAT基因;对其进行生物信息学分析及鉴定,然后构建pGEX-6P-1（＋）-FgAT重组表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达,再对纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明,大片吸虫FgAT基因的大小为1 356 bp,编码452个氨基酸残基。生物信息学分析表明,FgAT二级结构预测以无规卷曲为主,抗原表位在整个序列中均有存在。优化后的α-微管蛋白为可溶性表达,Western-blot分析结果表明其具有良好的免疫反应性。本研究首次克隆并鉴定了大片吸虫α-微管蛋白基因,表达的重组蛋白具有良好的免疫反应性,该蛋白是潜在的大片吸虫诊断靶标。
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