作者：杨亚东; 张俊峰; 张春杰; 陈松彪; 程相朝...prrsv减毒猪霍乱沙门菌二联疫苗生物学特性
摘要：为构建能稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌，以pMDl9-T—ORF5—7为模板，PCR分别扩增出ORF5和ORF6，将2个基因先后插入表达载体PYA3493，构建了重组质粒nA3493-ORF5-ORF6。PCR、双酶切及测序结果表明．成功构建了重组质粒pYA3493—0RF5-ORF6。将该重组质粒电转至减毒猪霍乱沙门菌AcrpAcyaAasdC78-1基因缺失株。获得PRRSVORF5-ORF6融合基因重组减毒猪霍乱沙门菌AcrpcyaAasdC78—1（pYA3493-ORF5-ORF6），并对该重组减毒猪霍乱沙门菌的生长特性、遗传稳定性和表达特性进行了测定。进一步对重组减毒猪霍乱沙门菌asdC78-1（pYA3493-ORFS-ORF6）研究发现，其生长速度比强毒株C78-1明显减慢，与asdC78-1缺失株及AcrpcyaAasdC78-1（pYA3493）互补菌株基本一致。在体外连续传代能够稳定遗传ORF5-ORF6融合基因。重组菌培养上清经SDS—PAGE能检测到ORF5-ORF6蛋白条带，且经Western—blot分析证实，重组菌共表达的GP5和M蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合。以上结果表明，能稳定携带ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌AcrpcyaAasdC78—1（pYA3493-ORF5-ORF6）构建成功，为开发猪繁殖与呼吸综合征和仔猪副伤寒基因工程二联疫苗奠定了良好基础。
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