作者：黄坚; 尹正军; 岳华; 汤承绵羊肺炎支原体荧光定量pcr检测部位临床应用
摘要：为建立快速检测绵羊肺炎支原体的荧光定量PCR方法,根据EF-Tu基因序列设计合成引物,构建含有EF-Tu基因的重组质粒,以其为标准品绘制标准曲线,检验该方法的特异性、敏感性和重复性,并用于临床样本的检测。结果显示,本研究建立的方法能特异性扩增绵羊肺炎支原体,与其他病原无交叉反应,最低检测限为5 copies/L,在5×10^4-5×10^9稀释度范围内具有良好的线性关系（r2=0.996）,检测的批内和批间变异系数均小于5%。对临床肺组织样本中绵羊肺炎支原体的检出率（105/134,78%）与基于P113基因的q RT-PCR方法的相符,而对鼻腔棉拭子样本的检出率（27/50,54%）略高于后者（25/50,50%）。对人工感染绵羊肺炎支原体山羊肺的病变部位、病健交界部位和无明显病变部位的检出率分别为1/6、6/6和4/6,确定肺的病健交界部位为最佳采样部位。对采自四川、新疆、青海的439份表观健康羊肺绵羊肺炎支原体的平均检出率分别为48%（61/126）、63%（103/163）和75%（113/150）,提示受检羊群仍存在严重的绵羊肺炎支原体带菌感染情况。该方法的建立对绵羊肺炎支原体感染的监测与快速诊断有重要意义。
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