作者:李云霄 金鑫 单雪梅 张营 任春宇牛d型产气荚膜梭菌纯化抗原斑点酶联免疫吸附试验
摘要:以纯化的菌体蛋白为诊断抗原,建立了牛D型产气荚膜梭茵特异性抗体的斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)检测方法,确定了各组分的最适反应条件:抗原包被浓度为1.95μg/mL,血清稀释度为1:320,二抗稀释度为1:2000,封闭液为30mL/L脱脂乳,抗原、血清、二抗和封闭液的作用温度及时间均为37℃ 30min。用该dot-ELISA检测30份牛血清,纯化抗原比粗提抗原的阳性检出率高16.7%;dot-ELISA的灵敏度是琼脂免疫扩散试验(AGID)法的43倍;用dot-ELISA法对100份牛血清样本进行检测,阳性率为59.0%;经特异性试验、重复性试验和与AGID法比较,表明用纯化抗原建立的方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。
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