作者：季新成; 陈杰; 张彦明; 吴发兴; 李晓成; ...猪瘟病毒野毒株e2基因克隆核苷酸序列氨基酸序列同源性重组dna载体基因工程疫苗
摘要：用RT-PCR方法扩增了陕西省近期猪瘟流行野毒株E2基因,并将其克隆到pMD 18-T载体;经转化、筛选、鉴定后,测定了核苷酸序列,根据C株、Brescia株和Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行gp55氨基酸序列推导,并进行同源性比较.结果表明,该猪瘟流行毒株的E2核苷酸序列与C株、Brescia株和Alfort株的E2核苷酸序列同源性分别为81.9%、83.4%和83.5%;相应地,gp55氨基酸同源性分别为94.8%、95.6%和95.3%.将此E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb后获得了重组质粒 pFBHT-E2,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用;经抗性及蓝白斑筛选得到了含E2基因的重组DNA,将其命名为rBacmid-E2.此研究为进一步在昆虫细胞中表达E2基因、开发研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础.
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