作者：刘亭; 宋菲; 杨健; 陆定艳; 林村勇; 薛维...参芎葡萄糖注射液h9c2细胞系抗氧化损伤作用
摘要：目的：建立热休克转录因子1（HSF1）高表达的H9c2细胞系,考察在HSF1高表达的情况下参芎葡萄糖注射液（SGI）对过氧化氢（H2O2）诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用。方法：构建GV1422-HSF1的重组质粒,并利用Fu GENE 6转染试剂将重组质粒转染至H9c2细胞中,用遗传霉素（G418）来筛选稳定转染细胞株,并用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HSF1和热休克蛋白70（HSP70）mRNA和蛋白的表达情况,来鉴定HSF1高表达的H9c2细胞系（H9c2-HSF1）是否建立成功。用H2O2（300μmol·L-1）处理H9c2-HSF1细胞0.5 h构建氧化损伤模型,考察HSF1高表达的情况下参芎葡萄糖注射液预处理对细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK）漏出量、丙二醛（MDA）和活性氧（ROS）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响,同时Western blot检测HSF1和HSP70蛋白表达情况。结果：Real-time PCR和Western blot实验结果显示：筛选出来的稳定转染细胞的HSF1和HSP70蛋白表达显著上调（P〈0.01）,表明H9c2-HSF1细胞系构建成功。经参芎葡萄糖注射液预处理6 h,H2O2损伤0.5 h后,与H9c2＋H2O2组和H9c2-HSF1＋H2O2组比较,对应给药组细胞的HSF1和HSP70蛋白表达显著上调（P〈0.01）,细胞存活率显著增高（P〈0.01）,LDH,CK释放量和MDA含量显著减少（P〈0.01）;ROS含量显著降低,GSH-Px和SOD活性明显升高。结论：本研究成功构建了HSF1高表达H9c2细胞系,并发现HSF1高表达能明显增强参芎葡萄糖注射液抗氧化损伤作用,其机制可能不在于增加细胞清除ROS能力,但可能与上调HSP70表达相关,需要进一步研究。
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