作者：叶廷巧; 马双陶; 李丹; 郑曦; 王强; 苏立...钙蛋白酶抑制蛋白转基因小鼠模型显微操作法
摘要：目的：将人的钙蛋白酶抑制蛋白（ calpastatin， CAST）外源基因整合到C57BL/6J小鼠中，构建高表达CAST的转基因小鼠模型。方法利用Gateway技术构建pRP．EX3d-EF1A-CAST-IRES-eGFP载体，回收片段后通过显微注射法将目的基因片段注入到C57 BL/6 J小鼠受精卵中，将其胚胎移植至同期发情的假孕受体母鼠输卵管内获得子代小鼠。采用PCR方法鉴定出阳性的转基因小鼠，确定首建鼠，通过与C57BL/6J小鼠回交后互交数代建系。利用RT-PCR和Western blotting方法检测CAST基因和蛋白在各组织中的表达情况。结果将90枚注射受精卵移植到3只假孕鼠中，3只均怀孕，移植成功率100％，产下23只子鼠，经PCR鉴定得到2只转基因阳性首建鼠，阳性率为9％。子代小鼠进行RT-PCR检查显示，CAST基因在转基因小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌中均有表达；Western blotting检查显示，CAST蛋白表达在转基因小鼠中显著高于同窝阴性小鼠。结论通过显微注射法成功构建CAST高表达的转基因小鼠，为进一步研究CAST奠定了良好的模型基础。
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