作者：韦相才; 卢丽; 黄冰; 韩俊英; 洪迅; 陈系...地中海贫血外源基因制备方法转基因小鼠重组质粒调控序列显微注射pcr扩增dna测序dna片段pcr法分离纯化基因克隆lcr基础纯合子杂交法酶反应酶切点杂交制作反向载体构建
摘要：目的探讨人地中海贫血β654基因为外源基因用于转基因小鼠制作时,外源基因的制备方法,为进一步制作转基因小鼠打下基础.方法采用反向点杂交法确诊人地中海贫血β654纯合子DNA,以PCR法扩增获得人地中海贫血β654基因,分离纯化后,通过连接酶反应将其克隆入含βLCR调控序列的基础载体pBGT51质粒中,经PCR扩增、酶切、反向点杂交及DNA测序鉴定重组质粒,用EcoR V酶切获得转基因所用的外源基因.结果将人地中海贫血β654基因作为外源基因克隆入基础载体pBGT51质粒中构建了重组质粒βBGT51,用EcoR V酶切获得含人β654基因及βLCR调控序列的6.5kb的DN段,制备了可用于显微注射转基因的外源基因.结论采用该方法构建的含人地中海贫血β654基因的重组质粒,可获得用于显微注射转基因的外源基因.
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