作者：丁倩倩 陈勤奋 王小钦骨髓增生异常综合征dna异常甲基化dna甲基转移酶抑制剂地西他滨
摘要：目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨（DAC）对骨髓增生异常综合征（MDS）转白血病细胞株SKM-1 P15INK4B基因甲基化状态的影响。方法对数生长期的SKM-1细胞设4组,每组1×10^6个细胞,其中3组为DAC处理组,分别以1.5、3.0和6.0μmol/L DAC处理SKM-1细胞48 h,另1组未加DAC的SKM-1细胞培养48 h作为对照组。甲基化特异性PCR（MSP）检测各组细胞P15^INK4B基因甲基化情况,实时荧光RT-PCR相对定量法检测P15^INK4B基因mRNA表达情况,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）法检测细胞增殖抑制情况,碘化丙啶（PI）单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞早期凋亡情况。结果 1）对照组SKM-1细胞的P15INK4B基因完全甲基化,3个DAC处理组的甲基化条带逐渐变浅,非甲基化条带出现并逐步加深;2）P15^INK4B基因mRNA表达水平：对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为1.00±0.12与0.91±0.13、0.51±0.06、0.43±0.04（P〈0.05）,3个DAC处理组之间差异甚微（P〉0.05）;3）CFSE平均荧光强度（MFI）：对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为51.67±1.61与55.33±2.28、56.33±2.50、55.71±2.87,仅3.0μmol/L组较对照组变化较明显（P〈0.05）,而各DAC处理组之间变化差异很小（P〉0.05）;4）G1期细胞比例（%）：对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为55.78±3.61与48.12±2.93、51.69±1.60、46.71±1.54,S期细胞比例（%）：4个组分别为44.22±3.61与51.88±2.93、48.31±1.60、53.29±1.54,其中1.5、6.0μmol/L组较对照组变化较明显（P〈0.05）,而DAC各处理组中,6.0与3.0μmol/L组之间具明显差异（P〈0.05）;5）早期凋亡率（%）：对照组与DAC为1.5、3.0、6.0μmol/L的3个处理组分别为2.91±0.26与7.77±0.22、12.45±0.28、13.86±0.27（P〈0.05）,DAC各处理组没有明显变化（P〈0.05）。结论 DAC能逆转SKM-1细胞的P15^INK4B基因完全甲基化状态,在一定程度上�
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